|
Работа включает несколько этапов
Получение вытяжки пигментов – отцентрифугировали культуру водорослей, объемом 150 мл, при 5 тыс/об в минуту, осадок аккуратно перенесли в ступку, добавили немного песка и растворителя (смесь спирта и ацетона 3:1) и тщательно растерли до гомогенизированного состояния. Экстракцию проводят следующим образом. В колбе Бунзена на пробке укрепили стеклянный фильтр №4. На дно коблы установили пробирку, в которую опускается конец стеклянного фильтра. Колбу соединили с воздушным насосом Камовского. Жидкость из ступки сливается по стеклянной палочке на фильтр, носик ступки предварительно смазывается вазелином снаружи во избежание растекания раствора. В ступку приливается еще 4-5 мл растворителя и содержимое вновь тщательно растирается, затем жидкость сливается в воронку и фильтруется в пробирку, вставленную в колбу Бунзена. Промывание проводиться до тех пор, пока вытекающий из воронки растворитель не станет бесцветным. После экстракции остается сероватая масса без признаков наличия пигментов. Объединенная порция экстракта доводиться растворителем до определенного объема (10мл). Экстракт содержит сумму зеленых и желтых пигментов.
Спектрофотометрирование.
Определение оптической плотности экстракта осуществляется на спектрофотометре. Область оптических плотностей в которой рекомендуется работать, лежит в пределах 0,2-0,8. Если оптическая плотность экстракта выше, то его следует разбавить. Образец разбавили в три раза. Для количественного определения часть полученного экстракта наливают в кварцевую кювету на 1 см. Вторая кювета заполняется чистым растворителем (80% ацетоном). Кюветы помещают в кюветное отделение и определяют поглощение при длинах волн, соответствующих максимумам определяемых пигментов.
Для вычисления содержания пигментов полученные величины оптической плотности подставляют в формулы.
Совершенствование техники спектрофотометрических измерений позволило уточнить коэффициенты полученных раньше.
Совершенствование техники спектрофотометрических измерений позволило уточнить коэффициенты полученных ранее формул. А также сделало возможным определение в суммарном субстрате пигментов не только хлорофиллов а и в, но и каротиноидов (мг/л) в 80 % ацетоне.
С а = 12,21*А663 – 2,81*А646
С в = 20,13*А646 – 5,03*А663
Скар = (1000*А470 – 3,27*Са -100*Св)/229
Таблица 1 Величины оптической плотности |
вариант |
λ=470 |
λ=646 |
λ=663 | |
Дина |
1,5 |
0,45 |
1,062 | |
Яна |
0,38 |
0,7 |
0,225 | |
Аня |
0,65 |
0,1 |
0,44 | |
Валя |
0,28 |
0,375 |
0,16 |
Рассчитали концентрацию пигментов, полученные данные занесли в таблицу 2.
Таблица 2 Концентрация пигментов в вытяжке | |
С а (мкг) |
С в (мкг) |
С кар (мг/л) | |
Дина |
35,1 |
10,8 |
14,1 | |
Яна |
0,7 |
12,9 |
-4,01 | |
Аня |
5,09 |
-0,2 |
2,85 | |
Валя |
0,9 |
6,74 |
-1,7 |
Вычислили содержание пигментов в вытяжке, тут же посчитали их содержание с учетом объема, массы пробы и разведения.
Fа = 9*20/1000*1 = 0,18г/г
Fв = 67,4*20/1000*1 = 1,35 мг/г
Fкар = -17*20/1000*1 = -0,34 мг/г
Нанесение пигментов на бумагу
Для разделения пигментов используют лист бумаги размером 16х16 см.
Перейти на страницу: 1 2 3 |
